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技術文獻

應如何快速消除ELISA干擾?

文字:[大][中][小] 2025-8-12    瀏覽次數:128    
     有稀釋標本、改變酶標抗體、標本中RF用變性IgG預先封閉、測定抗原時加入還原劑、包被或酶標二抗使用特異的雞抗體IgY、對臨床血清標本加熱滅活補體、使用特異的兔F(ab’)2片段作為固相或測定酶標抗體、在標本或標本稀釋液中加入過量的動物Ig、使用靶特異的非Ig親和蛋白替代固相或酶標抗體之一等方法。
稀釋標本
     在測定前對標本進行稀釋,特異的IgM因高滴度存在仍可檢出,而非特異的RF則會因為稀釋變成非常低的滴度,從而 對測定幾乎不產生干擾。

改變酶標抗體
    將待酶標的抗體的F片段酶切夫除,僅留下具有特異結合功能的F(ab’)2部分標記酶,則在測定中即可避免RF的干擾。

標本中RF用變性IgG預先封閉
   將經熱變性(63℃,10min)的動物如兔、羊等的IgG加入到標本稀釋液中,或是將該變性IgG連接至一顆粒固相如聚苯乙烯微球或微孔,然后加入臨床血清標本,反應后,再吸出標本進行檢測2。

測定抗原時加入還原劑
    在標本中加入可使RF降解的還原劑,如2—巰基乙醇。2—巰基乙醇等還原劑可使抗體內的巰基裂解,因而可以去除RF的干擾,但只適用于抗原測定。

包被或酶標二抗使用特異的雞抗體IgY
    RF不與雞IgY反應,如果包被和酶標二抗均為雞IgY抗體,則不受標本中RF的干擾2。

對臨床血清標本加熱滅活補體
   采用56℃30min加熱可使標本中的補體C1滅活。

使用特異的兔F(ab’)2片段作為固相或測定酶標抗體
    異嗜性抗體可通過交聯固相和酶標的單抗或多抗而出現假陽性反應。使用特異的兔F(ab’)2片段作為固相或測定酶標抗體可以避免這種干擾。

在標本或標本稀釋液中加入過量的動物Ig
封閉可能存在的異嗜性抗體,從而避免其干擾。

使用靶特異的非Ig親和蛋白替代固相或酶標抗體之一
這種方法可以避免異嗜性抗體的干擾。

以上方法可以幫助快速消除ELISA干擾。在實際操作中,可以根據具體情況選擇合適的方法或組合使用多種方法。
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