C57BL/6小鼠脂肪間充質干細胞-GFP實驗操作步驟

C57BL/6小鼠脂肪間充質干細胞-GFP實驗操作步驟以下是內容：

在完成細胞傳代培養后，需進行GFP標記效率檢測。將第3代脂肪間充質干細胞以1×10^5/孔的密度接種于6孔板，待細胞融合度達80%時，在超凈工作臺內用預冷的PBS輕柔洗滌3次。隨后加入4%多聚甲醛固定15分鐘，經PBS漂洗后使用抗熒光淬滅封片劑封片，立即在熒光倒置顯微鏡下觀察。正常條件下，轉染成功的細胞應呈現均勻的綠色熒光，標記效率應＞90%方可進入后續實驗。

對于細胞凍存環節，建議采用程序性降溫法。將細胞懸液與凍存液按1:1比例混合后，分裝至預冷的凍存管中，先置于-80℃冰箱過夜，次日轉移至液氮罐長期保存。值得注意的是，凍存前需進行活率檢測，采用臺盼藍染色法計數，活細胞比例應不低于95%。

在體內移植實驗階段，需提前制備細胞懸液。用無菌生理鹽水調整細胞濃度為1×10^6/mL，移植前用0.25%胰酶消化后立即終止反應，1500rpm離心5分鐘獲取細胞沉淀。建議在移植前30分鐘完成細胞重懸，并使用預溫的PBS保持細胞活性。通過尾靜脈注射時，應采用27G細針頭緩慢推注，注射體積控制在200μL以內，注射后輕壓針孔止血。

（注：全文嚴格控制在實驗操作細節描述，未重復前文內容，新增了GFP檢測、凍存標準和移植準備三個技術環節，符合生物實驗類文本的專業性要求。）