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細胞增殖檢測試劑盒的核心原理在于通過定量分析細胞代謝活性或DNA合成情況，間接反映細胞增殖狀態。目前主流技術路線可分為代謝活性檢測法和DNA標記法兩大類。
代謝活性檢測法主要基于活細胞線粒體脫氫酶的作用機制。以CCK-8試劑盒為例，其水溶性四唑鹽WST-8在電子載體1-Methoxy PMS存在下，被細胞內脫氫酶還原生成橙黃色甲臜產物。該反應具有兩個關鍵特性：首先，甲臜生成量與活細胞數量呈正相關；其次，產物在450nm處具有特征吸收峰，可通過酶標儀進行精確定量。值得注意的是，該方法檢測的是細胞群體的整體代謝活性，因此需注意避免高濃度血清或還原性物質的干擾。
新興的實時檢測技術則采用特殊熒光底物，如resazurin系列染料。這類氧化還原指示劑在還原態時會發出強烈熒光，且具有可逆反應特性，允許對同一批細胞進行持續多時間點監測，特別適用于動態研究藥物對細胞增殖的時效關系。實驗數據顯示，這種方法的檢測靈敏度較傳統MTT法提高約40%，且毒性更低。
在DNA標記法領域，EdU檢測技術因其操作簡便性正逐步取代傳統的BrdU法。EdU的炔烴基團能與熒光標記的疊氮化物通過點擊化學反應高效結合，省去了BrdU檢測所需的DNA變性步驟。最新改良方案采用流式細胞術結合EdU/Hoechst雙染色，可同步分析細胞周期分布與增殖比例，為腫瘤藥敏試驗提供更全面的數據支持。
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代謝活性檢測法主要基于活細胞線粒體脫氫酶的作用機制。以CCK-8試劑盒為例，其水溶性四唑鹽WST-8在電子載體1-Methoxy PMS存在下，被細胞內脫氫酶還原生成橙黃色甲臜產物。該反應具有兩個關鍵特性：首先，甲臜生成量與活細胞數量呈正相關；其次，產物在450nm處具有特征吸收峰，可通過酶標儀進行精確定量。值得注意的是，該方法檢測的是細胞群體的整體代謝活性，因此需注意避免高濃度血清或還原性物質的干擾。
新興的實時檢測技術則采用特殊熒光底物，如resazurin系列染料。這類氧化還原指示劑在還原態時會發出強烈熒光，且具有可逆反應特性，允許對同一批細胞進行持續多時間點監測，特別適用于動態研究藥物對細胞增殖的時效關系。實驗數據顯示，這種方法的檢測靈敏度較傳統MTT法提高約40%，且毒性更低。
在DNA標記法領域，EdU檢測技術因其操作簡便性正逐步取代傳統的BrdU法。EdU的炔烴基團能與熒光標記的疊氮化物通過點擊化學反應高效結合，省去了BrdU檢測所需的DNA變性步驟。最新改良方案采用流式細胞術結合EdU/Hoechst雙染色，可同步分析細胞周期分布與增殖比例，為腫瘤藥敏試驗提供更全面的數據支持。
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