免疫組化基本技術(shù)原理

    免疫組化技術(shù)是一種綜合定性、定位和定量；形態(tài)、機(jī)能和代謝密切結(jié)合為一體的研究和檢測(cè)技術(shù)。在原位檢測(cè)出病原的同時(shí)，還能觀(guān)察到組織病變與該病原的關(guān)系，確認(rèn)受染細(xì)胞類(lèi)型，從而有助于了解疾病的發(fā)病機(jī)理和病理過(guò)程。

    免疫酶組化技術(shù)是通過(guò)共價(jià)鍵將酶連接在抗體上，制成酶標(biāo)抗體，再借酶對(duì)底物的特異催化作用，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，于普通顯微鏡或電鏡下進(jìn)行細(xì)胞表面及細(xì)胞內(nèi)各種抗原成分的定位，根據(jù)酶標(biāo)記的部位可將其分為直接法（一步法）、間接法（二步法）、橋聯(lián)法（多步法）等，用于標(biāo)記的抗體可以是用免疫動(dòng)物制備的多克隆抗體或特異性單克隆抗體，最好是特異性強(qiáng)的高效價(jià)的單克隆抗體。直接法是將酶直接標(biāo)記在第一抗體上，間接法是將酶標(biāo)記在第二抗體上，檢測(cè)組織細(xì)胞內(nèi)的特定抗原物質(zhì)。目前通常選用免疫酶組化間接染色法。

    那么，顯色常用的酶為辣根過(guò)氧化物酶（HRP），常用的顯色底物為DAB（3,3’-二氨基聯(lián)苯胺），偶爾用AEC（3-氨基-9-乙基咔唑）。堿性磷酸酶（AP或AKP）也是目前免疫診斷試劑最常用的標(biāo)記酶之一，穩(wěn)定性好、靈敏度高。免疫組化技術(shù)的應(yīng)用范圍極為廣泛，尤其在腫瘤病理診斷中發(fā)揮著不可替代的作用。通過(guò)特異性抗體標(biāo)記，可以準(zhǔn)確區(qū)分腫瘤細(xì)胞的來(lái)源和分化程度，例如利用細(xì)胞角蛋白（CK）標(biāo)記上皮源性腫瘤，波形蛋白（Vimentin）標(biāo)記間葉組織腫瘤。在神經(jīng)病理學(xué)領(lǐng)域，膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）能特異性顯示星形膠質(zhì)細(xì)胞，而突觸素（Syn）則可用于突觸前末梢的定位研究。

    此外，免疫組化技術(shù)還可用于感染性疾病的病原體檢測(cè)。例如，針對(duì)EB病毒潛伏膜蛋白（LMP-1）的免疫組化染色可輔助診斷鼻咽癌，而針對(duì)HPV（人乳頭瘤病毒）的免疫標(biāo)記則有助于宮頸病變的鑒別診斷。在自身免疫性疾病研究中，通過(guò)檢測(cè)組織中免疫復(fù)合物的沉積（如IgG、IgM、補(bǔ)體C3等），可以輔助診斷系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等疾病。

   隨著技術(shù)的進(jìn)步，多重免疫熒光染色（Multiplex Immunofluorescence）逐漸成為研究熱點(diǎn)。該方法通過(guò)不同熒光標(biāo)記的抗體同時(shí)檢測(cè)多種抗原，結(jié)合高分辨率共聚焦顯微鏡，可在同一組織切片上實(shí)現(xiàn)多靶點(diǎn)共定位分析，為腫瘤微環(huán)境、免疫細(xì)胞浸潤(rùn)等研究提供更全面的信息。未來(lái)，隨著人工智能圖像分析技術(shù)的發(fā)展，免疫組化結(jié)果的判讀將更加標(biāo)準(zhǔn)化和高效化，進(jìn)一步推動(dòng)精準(zhǔn)醫(yī)療的實(shí)現(xiàn)。