技術(shù)文獻(xiàn)
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血液RNA提取的方法可以細(xì)分為需要預(yù)先處理和不需要預(yù)先處理兩類。
眾所周知，人和其他哺乳動物血液只有白細(xì)胞（不到總數(shù)的 5%）等少量細(xì)胞含有RNA，需要預(yù)先處理的血液 RNA 提取法其實就是分離白細(xì)胞再提取RNA， 本質(zhì)上是白細(xì)胞RNA提取。分離白細(xì)胞的方法有 Ficoll-Hypaque 密度離心法（白細(xì)胞在 Buffy Coat 中)和紅細(xì)胞裂解法。由于預(yù)處理操作會劇烈改變血液RNA含量（British J. Haematol.， 126:231， 2004），所以無預(yù)處理 提取法將是未來提取血液RNA的發(fā)展方向。
白細(xì)胞RNA提取和全血RNA提取都需注意以下問題：
一、血液越新鮮越 好，因血液細(xì)胞內(nèi)外都有大量 RNase，容易使RNA降解。血液在 4℃的放置 時間最好不要超過四天；
二、盡可能抑制或滅活血液特有的RNase（如 EDN， ECP），因為它們不但跟 RNase A 一樣非常穩(wěn)定，而且不被 RNase Inhibitor 和 RVC 抑制，還能抑制逆轉(zhuǎn)錄酶的活性，它們殘留在RNA樣品中不但會降解RNA，還會干擾后續(xù)的RT-PCR反應(yīng)；
三，血液富含糖蛋白，粘蛋白和血紅蛋白，提取需要去除糖蛋白污染；
四，由于RNA量少，提取時很容易丟失， 可以適當(dāng)使用核酸沉淀助沉劑；
五，血液細(xì)胞量隨生理病理因素變化波動性大， 注意調(diào)整血液和提取試劑的最佳用量。 最簡單的方法是使用已經(jīng)經(jīng)過廠家優(yōu)化的產(chǎn)品，比如用于白細(xì)胞RNA提取的 TRIzol、QIAamp RNA Blood Mini Kit 和xuanya的動物 RNAOUT；用于全血RNA 提取的 TRIzol LS，PAXgene Blood RNA Kit 和xuanya的全血RNAOUT和柱式血液RNAOUT。
眾所周知，人和其他哺乳動物血液只有白細(xì)胞（不到總數(shù)的 5%）等少量細(xì)胞含有RNA，需要預(yù)先處理的血液 RNA 提取法其實就是分離白細(xì)胞再提取RNA， 本質(zhì)上是白細(xì)胞RNA提取。分離白細(xì)胞的方法有 Ficoll-Hypaque 密度離心法（白細(xì)胞在 Buffy Coat 中)和紅細(xì)胞裂解法。由于預(yù)處理操作會劇烈改變血液RNA含量（British J. Haematol.， 126:231， 2004），所以無預(yù)處理 提取法將是未來提取血液RNA的發(fā)展方向。
白細(xì)胞RNA提取和全血RNA提取都需注意以下問題：
一、血液越新鮮越 好，因血液細(xì)胞內(nèi)外都有大量 RNase，容易使RNA降解。血液在 4℃的放置 時間最好不要超過四天；
二、盡可能抑制或滅活血液特有的RNase（如 EDN， ECP），因為它們不但跟 RNase A 一樣非常穩(wěn)定，而且不被 RNase Inhibitor 和 RVC 抑制，還能抑制逆轉(zhuǎn)錄酶的活性，它們殘留在RNA樣品中不但會降解RNA，還會干擾后續(xù)的RT-PCR反應(yīng)；
三，血液富含糖蛋白，粘蛋白和血紅蛋白，提取需要去除糖蛋白污染；
四，由于RNA量少，提取時很容易丟失， 可以適當(dāng)使用核酸沉淀助沉劑；
五，血液細(xì)胞量隨生理病理因素變化波動性大， 注意調(diào)整血液和提取試劑的最佳用量。 最簡單的方法是使用已經(jīng)經(jīng)過廠家優(yōu)化的產(chǎn)品，比如用于白細(xì)胞RNA提取的 TRIzol、QIAamp RNA Blood Mini Kit 和xuanya的動物 RNAOUT；用于全血RNA 提取的 TRIzol LS，PAXgene Blood RNA Kit 和xuanya的全血RNAOUT和柱式血液RNAOUT。
