HE染色常見的問題及解決方法

     HE染色法是組織學、胚胎學、病理學教學與科研中最基本、使用最廣泛的技術方法。一張質量上乘的HE切片是病理醫生得以做出正確診斷的關鍵。影響HE染色質量的因素是多方面的。本文主要對HE染色中常見的幾個問題及其對策進行分析討論。


      蘇木精——伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，簡稱HE染色法 ，石蠟切片技術里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性 ，主要使細胞核內的染色質與胞質內的核酸著紫藍色 ；伊紅為酸性染料 ，主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色 。

HE染色常見的問題及解決方法

問題1  切片呈霧狀/發灰/發白，核染色模糊

原因：①待封還潮；②蘇木素過氧化老化，冰醋酸揮發；③脫水，透明劑不良，雜質過多；

解決方法：①空氣除濕；②蘇木素過濾后加入冰醋酸（促染劑）；③常規更換酒精，二甲苯。


問題2  染色不均

原因：①固定不充分；②高濃度酒精脫水時間過長；③浸蠟不佳；④染色時間掌握不好；

解決方法：①定期更換染色液；②用2%鐵明礬處理；③浸蠟溫度高于熔點2℃左右；④蘇木素染色鏡下控制。

問題3  細胞成分藍色，如粘液，膠原蛋白或平滑肌

原因：①蘇木素溶液過染；②分化不充分；③蘇木素溶液的PH值＞3；

解決方法：①縮短染色時間；②用1%鹽酸酒精分化2-5s，洗脫過染胞核，不應著色的組織成分；③用乙酸調節蘇木素PH值為2.5；④提高酸性酒精的濃度。

問題4  細胞核染色太淺
原因：①蘇木素溶液過老化；②分化時間過長；③蘇木素溶液染色時間短；④固定處理不良，組織不易染色；解決方法：①過濾后100ml蘇木素+1ml冰醋酸，或更換新鮮蘇木素溶液；②減少分化時間或稀釋分化液；③延長蘇木素染色時間；④高濃度酒精固定時間過長，染不上色，用2%鐵明礬處理。
 問題5  胞質染色太深

原因：①切片在伊紅溶液中時間過長；②伊紅染色后分化不足；③伊紅染液可能過濃；

解決方法：①減少伊紅溶液染色時間，稀釋伊紅染液；②85%酒精增加分化時間。

問題6  胞質染色太淡

原因：①伊紅染液使用時間太久；②伊紅染液的PH值＞4.5，乙醇脫水易褪色；③伊紅染液后酒精沖洗不正確；④伊紅染色時間太短；

解決方法：①更換新鮮的伊紅染液；②用濃醋酸調節伊紅染液PH值（4~4.5），伊紅PH值＜3.6，核發紫，對比不強；伊紅染液PH值＞5，染不上；③減少伊紅步驟后酒精沖洗的時間；④增加伊紅溶液的染色時間。

問題7  細胞核發紅棕色

原因：①蘇木素染色液氧化過度；②返藍不足；

解決方法：①及時更換然染液；②返藍可用流水、溫水或稀氨水、0.2%碳酸氫鈉等。