豬傳染性胃腸炎病毒 RT-PCR 檢測試劑盒

豬傳染性胃腸炎（Transmissible gastroenteritis，TGE）是由冠狀病毒
科的傳染性胃腸炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus，TGEV）引起
的豬的一種高度接觸性傳染病，其臨床癥狀以嘔吐、嚴重腹瀉和脫水性腸炎為主
要特征。不同年齡和品種的豬均易感，尤其對 2 周齡以內的仔豬致死率高達
100％，給養豬業造成巨大經濟損失。TGEV 為不分節段的單股正鏈 RNA 病毒，
具有 4 種結構蛋白，其中編碼病毒核衣殼（N）蛋白的 N 基因高度保守，故 N
基因可被作為 RT-PCR 診斷的最佳基因。本試驗根據 N 基因序列設計特異性檢
測引物，建立了檢測 TGEV 的 RT-PCR 方法。它具有下列特點：
1. 用于 TGEV 的定性鑒定檢測和分子流行病學調查。
2. 能對樣品中 TGEV 進行快速檢測，具有良好的特異性和敏感性。
3. 使用一管式 RT-PCR 試劑盒，減少了操作步驟，降低了操作誤差。

運輸及保存:

使用方法:

一、樣品 RNA 的制備
用自選方法純化 TGEV 樣品的 RNA，也可以另購本公司的一管式病毒
RANout 或柱式病毒 RNAout，上述兩款產品跟本試劑盒兼容。
二、陽性對照
1. 為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體病毒做陽性對
照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 使用本陽性對照時，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。
最好在專門的區域操作。
三、設置 RT-PCR 反應（30 uL 體系）
3. 在 PCR 管中加入下列成分：
成 份 樣品 陽性對照 陰性對照
雙酶一管式 RT-PCR Buffer，2× 15 uL 15 uL 15 uL
TGEV 專一性引物對 2 uL 2 uL 2 uL
樣品 RNA 1-5 uL 無 無
TGEV 陽性對照 無 2 uL 無
補超純水到 28 uL 28 uL 28 uL
MMLV-Taq Mix 2 uL 2 uL 2 uL
4. 輕柔混勻后上機，按下面參數進行 RT-PCR。
過程 溫度 時間
逆轉錄 60℃ 30 分鐘
預變性 95℃ 3 分鐘
PCR 反應
（35 個循環）
94℃ 30 s
55℃ 40 s
72℃ 30 s
延伸 72℃ 7 分鐘
5. 電泳檢測 RT-PCR 產物。預期的 PCR 產物長度為 224 bp