鸚鵡熱衣原體(Chlamydia psittaci, C.psittaci, Cps) 形狀呈圓形或橢圓
形，直徑約 0.3μm 左右，在細胞空泡中增值，形成疏松包涵體。鸚鵡熱衣原體
是自然性疫源，可在哺乳動物之間傳播。鸚鵡熱衣原體和沙眼衣原體(C.
trachomatis, Ct)、肺炎衣原體(C.pneumoniae, Cpn)和反芻動物衣原體(C.
pecorum, Cpe)是四種最常見的衣原體。衣原體可以引起哺乳動物的流產、肺炎、
腸炎、腦脊髓炎、多漿膜炎、多關節炎、角膜結膜炎、尿道炎及雞的輸卵管炎等
癥。早期、快速、簡便檢測衣原體對診治、延緩該病的傳播和預防并發癥顯得尤
為重要。本產品即是基于熒光定量 PCR 法的鸚鵡熱衣原體快速檢測試劑盒。它
具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單，定量準確快速。
2. 根據 Cps 主要外膜蛋白(MOMP)基因的保守序列設計引物，引物經過優化，
特異性高。預期的 PCR 產物長度為 100 bp。
3. 熒光定量 PCR 檢測，所含 SYBR Green I 只與雙鏈 DNA 結合，反應特異
性強。
4. 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

運輸及保存:

使用方法:

一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關
鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體
檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃
度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品
或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產
品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DNA
片段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（最好用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到
10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7
拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充
分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5
拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復上面的操作直到得到 6
個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR（見下步），每個
樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，
并以之為縱軸，以濃度的對數值為橫軸，繪制標準曲線。
三、PCR 檢測（20 μL 體系）
1. 在 PCR 管中加入下列成分（待測樣品需要做三次重復，下表只列出一次）：
成分 樣品 陰性對照
2×qPCR Mix 10 μL 10 μL
Cps DNA 模板 1-5 μL 無
陽性對照 無 無
自備 1×ROX (見注) 2 μL 2 μL
Cps 專一性引物一（正向引物） 1 μL 1 μL
Cps 專一性引物二（反向引物） 1 μL 1 μL
補水到 20 μL
注: 僅 ABI7500、7700 和 7900 儀器需要使用 ROX 作為對照，其他熒光
PCR 儀器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、
MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）
不需要使用 ROX。
2. 建議 PCR 反應參數（具體 PCR 參數可以根據儀器不同而自行優化）
過程 溫度 時間
活化 95℃ 20 s
PCR 反應
（40 個循環）
95℃ 5 s
60℃ 25 s
熔解曲線分析
95℃ 15 s
60℃ 1 min
95℃ 15 s
60℃ 15 s
3. 數據采集
具體操作按所用儀器推薦的流程進行。本產品中所含的熒光染料在不結合
DNA 時，最大吸收光譜在 471nm，結合 DNA 時的最大吸收光譜在 500nm，
最大發射光譜在 530nm。
四、數據處理
以 Cps 陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標準曲線。再
以待測樣品濃度的 log 為橫軸，以 Ct 值為縱軸，通過待測樣品的 Ct 值計算
出樣品 DNA 的濃度。