非洲豬瘟(Af rican swine fever , ASF) 是由非洲豬瘟病毒(Af rican swine fever
virus , ASFV) 引起豬的一種急性、熱性、高度接觸傳染性疾病，病死率高達 100 %,是
我國一類動物疫病和世界動物衛(wèi)生組織規(guī)定的必須報告的動物疫病，受到世界各國的高
度重視。因此 ASFV 的快速準(zhǔn)確鑒定，對該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用。目前，對于
中國這種非 ASF 疫區(qū)，ASF 的檢測主要以丌涉及活病毒傳代操作的 PCR 為主，為此本
公司開發(fā)了 ASFV 的 PCR 檢測試劑盒，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒 DNA 模板。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，靈敏性比使用世界動物衛(wèi)生組織推薦的引物高 100 倍以上。
3. 特異性高，引物是根據(jù)保守的 vp73 基因設(shè)計，OIE（世界動物衛(wèi)生組織）推薦。
4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

運輸及保存:

使用方法:

一、樣品 DNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 DNA。注意：可以選用本公司的一管式病毒 DNAout 戒柱
式病毒 DNAout 產(chǎn)品。
二、PCR（60 uL 體系）
1、樣品管：在 PCR 管中加入下列成分：
成分 加入量
PCR MagicMix 2.0 30 uL
待檢測樣品 DNA(自備) X
ASFV 專一性引物一 2 uL
ASFV 專一性引物二 2 uL
補水到 60 uL
三、PCR 反應(yīng)參數(shù)：
過程 溫度 時間
預(yù)變性 94℃ 5 min
PCR 反應(yīng)
（35 個循環(huán)）
94℃ 1 min
50℃ 1 min
72℃ 1 min
最后延伸 72℃ 10 min
四、電泳檢測
1、取 10-20 uL PCR 產(chǎn)物直接在 PAGE 戒瓊脂糖凝膠上電泳，最好使用 100 bp DNA
Marker，產(chǎn)物的大小為 278 bp。