狐貍源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒實驗方法步驟

狐貍源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒實驗方法步驟:

方法

1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix (2mM)             

4 μl     引物1(10pM)                 

2 μl     引物2(10pM)                 

2 μl     Taq酶 (2U/μl)               

1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。

2調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,在72℃ 保溫7min。
人角膜上皮細胞完全培養基
人視網膜色素上皮細胞完全培養基
人視網膜微血管內皮細胞完全培養基
人角膜成纖維細胞完全培養基
人小梁網細胞完全培養基
人視網膜muller細胞完全培養基
人角膜內皮細胞完全培養基
人脈絡膜微血管細胞完全培養基
人牙周膜成纖維細胞完全培養基
大鼠肺微血管內皮細胞完全培養基
大鼠肺血管平滑肌細胞完全培養基
大鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞完全培養基
大鼠氣管上皮細胞完全培養基
大鼠氣管平滑肌細胞完全培養基
大鼠肺成纖維細胞完全培養基
大鼠支氣管上皮細胞完全培養基
大鼠支氣管成纖維細胞完全培養基
大鼠肺大靜脈平滑肌細胞完全培養基
大鼠肺大動脈平滑肌細胞完全培養基
大鼠肺大動脈內皮細胞完全培養基
大鼠肺動脈成纖維細胞完全培養基
大鼠肺大靜脈內皮細胞完全培養基
大鼠氣管和支氣管上皮細胞完全培養基
大鼠胰島細胞完全培養基
大鼠胰腺星狀細胞完全培養基
大鼠胰腺導管上皮細胞完全培養基
大鼠頜下腺上皮細胞完全培養基
大鼠腮腺細胞完全培養基
大鼠乳腺上皮細胞完全培養基

3結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。