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技術文獻

小鼠血清總補體(CH50)Elisa測定試劑盒原理

文字:[大][中][小] 2024-12-25    瀏覽次數:512    
      小鼠血清總補體(CH50)Elisa測定試劑盒,作為生物醫學研究中的重要工具,其精確性和便捷性對于科研人員來說至關重要。該試劑盒通過酶聯免疫吸附試驗(Elisa)原理,能夠高效地測定小鼠血清中總補體的活性水平,為疾病模型的建立、藥物療效評估以及免疫機制的研究提供了有力的支持。

     在實驗中,科研人員首先需要將小鼠血清樣本按照說明書要求進行預處理,然后加入到預先包被有特異性抗體的微孔板中。經過一系列溫育、洗滌、加酶標抗體、再溫育、顯色及終止反應等步驟后,通過酶標儀測定各孔的吸光度值。根據標準曲線,即可計算出小鼠血清中總補體的活性單位。


方法與結果

1 色譜條件選擇

 色譜柱:HYPERSIL ODS(10肛m,200 mm× 4.6 mm,),流動相:乙腈一甲醇一水一磷酸 (體積比為18.40:27.50:54.10:0.05),流速: 0.8 mL·min~,檢測波長:207 nm,柱溫:20℃ , 進樣量:20 L。

2 標準溶液及內標溶液的配制

 精密稱取人參皂苷Re適量,用無水甲醇溶 解配制成1 mg·I -1的標準儲備液,稀釋標準儲備 液得100 mg·L 標準工作液。內標物*用無水甲醇溶解配成100 mg·L-1內標儲備液,稀釋 內標儲備液得20 mg·L-1的內標工作液,置冰箱 中冷凍保存。

 3 給藥方法

 對大鼠實施頸靜脈持久性插管術[ 】,術后大 鼠單籠飼養,72 h后供實驗使用,在每次取血的 間隔內將導管內充滿100 mg·L-1肝素生理鹽水 以防血凝。大鼠實驗前禁食12 h交叉靜注20、 30、40 mg·kg-1不同劑量的人參皂苷Re注射液, 交叉實驗的實驗間隔為72 h。于給藥前和給藥后 5、10、20、30、45、60、90、120 min各取血250 L置 于涂有肝素的塑料離心管中,離心(3 000 r·min-1) 5 rain,取血漿100肚L,置于冰柜(一18℃)中保存待測。

4 血漿樣品的處理

 精密吸取血漿樣品100 L置5.0 mL具塞 離心試管中,加入2 mI 正丁醇和20 L內標工 作液,置液體快速混合器上振蕩5 min。離心 (5 000 r·min-1)10 min,移取上清液,氮氣吹干, 用流動相溶解。離心(10 000 r·min-1)10 min,取 上清液進樣20肚L。

5 專屬性考

 按“2.4”條方法操作。實驗條件下,血漿中雜 質不干擾樣品及內標物的測定,人參皂苷Re及 內標物*的保留時間分別為15 min和 17 min,。


值得注意的是,為了保證實驗結果的準確性和可靠性,整個操作過程需要嚴格遵守試劑盒的使用說明,并控制好實驗條件,如溫度、時間等。此外,對于不同批次的小鼠血清樣本,還需要進行平行對照實驗,以消除實驗誤差對結果的影響。

小鼠血清總補體(CH50)Elisa測定試劑盒的應用范圍廣泛,不僅可用于小鼠免疫學研究,還可用于疾病診斷、預后判斷以及疫苗效果評估等領域。隨著生物醫學研究的不斷深入和發展,該試劑盒將在未來發揮更加重要的作用,為科研人員提供更加準確、快速和便捷的實驗手段,推動生物醫學研究的進步和發展。



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