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PCR檢測(cè)試劑盒

乳酸桿菌屬通用PCR檢測(cè)試劑盒

文字:[大][中][小] 2024-3-14    瀏覽次數(shù):290    
商品屬性
產(chǎn)品名稱 英文名稱 貨號(hào)
乳酸桿菌屬通用PCR檢測(cè)試劑盒
Lactococcus spp. PCR
YS-P014359
規(guī)格:50T
分類:PCR檢測(cè)試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光。
有效期:一年

貨期:現(xiàn)貨PCR試劑盒的有效期一般為1年,這是指在適當(dāng)?shù)膬?chǔ)存溫度下。核酸擴(kuò)增部分的試劑一般要貯存于-20℃下,產(chǎn)物檢測(cè)部分試劑則貯存于2-8℃。盡量避免反復(fù)凍融。

【結(jié)果分析條件設(shè)定】
u 基線(Baseline)設(shè)定:應(yīng)選擇該次實(shí)驗(yàn)指數(shù)擴(kuò)增前所有樣本熒光信號(hào)比較穩(wěn)定的一段區(qū)域(所有樣本熒光信號(hào)無(wú)較大波動(dòng)),起始點(diǎn)(Start)應(yīng)避開熒光采集起始階段的信號(hào)波動(dòng),終止點(diǎn)(End)應(yīng)比最早出現(xiàn)指數(shù)擴(kuò)增的樣本Ct值減少1~3個(gè)循環(huán),建議基線設(shè)為6~15。
u 閾值(Threshold)設(shè)定:將閾值線設(shè)定在剛好超過(guò)正常陰性質(zhì)控品擴(kuò)增曲線的最高點(diǎn)。
【質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)】
1.   陰性質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陰性,無(wú)指數(shù)擴(kuò)增期,Ct=40或無(wú)Ct;
2.   陽(yáng)性質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性,有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期,Ct值應(yīng)小于等于35;
3.   以上要求需在一次實(shí)驗(yàn)中同時(shí)滿足,否則該次實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。
【結(jié)果判斷】
1.   陽(yáng)性:有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期,且Ct<38;
2.可疑:有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期,且38≤Ct<40,此時(shí)樣本為可疑樣本;對(duì)于可疑樣本建議復(fù)核一次,若復(fù)核結(jié)果Ct<40且有指數(shù)擴(kuò)增期,則判定為陽(yáng)性,否則判定為陰性;
3.   陰性:無(wú)指數(shù)擴(kuò)增期,Ct=40或無(wú)Ct值均判定為陰性樣本。
【對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1.   實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染、試劑污染、樣品交叉污染會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果;

2.   試劑運(yùn)輸、保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,可能會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

PCR反應(yīng)的特異性:
   ①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
   ②堿基配對(duì)原則;
   ③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
   ④靶基因的特異性與保守性。
乳酸桿菌屬通用PCR檢測(cè)試劑盒其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
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