PCR-SSCP擴增分析闡述

        PCR-SSCP(聚合酶鏈反應-單鏈構象多態性)分析技術是一種基于單鏈DNA構象差別的快速、敏感、有效地檢測基因點突變的DNA多態方法。其基本原理是對已知有基因點突變的遺傳病，在其突變位點附近設計引物進行PCR擴增，將擴增的產物取出一部分（一般為1pl），變性后在不含變性劑的中性聚丙烯酰胺凝膠中電泳，由于單鏈DNA中堿基配對或聚集，當溫度或變性劑等環境改變會引起不同的構象。 

      PCR產物稀釋倍數、甘油濃度、電壓、電泳溫度幾個重要的因素進行探討.方法:通過應用PCR-SSCP方法結合核苷酸序列分析檢測成都漢族群體98個個體人類補體第8成分(C8A)基因型頻率分布.結果:凝膠濃度為8%,PCR產物稀釋4倍,上樣量為4μl,不加甘油,電壓為200V,恒溫電泳時,SSCP分析可得到滿意的結果.結論:PCR-SSCP分析對不同的研究對象,其分析參數不同,需要對其分析條件進行最大優化,才能獲得實驗的成功.

      相同長度的單鏈DNA因其堿基順序不同，甚至單個堿基的差異會形成不同的構象從而導致電泳時泳動速度不同。如靶DNA中發生堿基替代等改變時就會出現泳動變位，從而鑒別有無基因突變。例如，無過氧化氫酶癥是一種常染色體隱性遺傳病，患者過氧化氫酶活性只有正常人的0.2%~0.4%，雜合體血液中過氧化氫酶活性則處于中間水平。過氧化氫酶基因由13個外顯子和12個內含子組成。應用”P標記PCR反應中底物方法，擴增第4個外顯子和內含子附近的203bp片段，應用SSCP法可清楚地判斷患者和雜合體。